小分子量有機酸鹼之混合物在電場中分布至膠體之特定區域以建立一個 pH 值梯度。當置入蛋白質混合物進行電泳分析時,每一種蛋白質均會泳動到恰等於本身等電點之 pH 值所在(表3- 6)。 不同等電點之蛋白質就可以在這種膠體
雙硫鍵的定位 如果蛋白質一級結構中有雙硫鍵存在,則它們會在定序完成後,以另一個步驟來決定。取原始蛋白質,先不打開雙硫鍵,直接以胰蛋白酶(Trypsin)切割。所得之胜肽片段與第一次胰蛋白酶切割片段比較。每一對雙硫鍵的存在會造成原有兩個片段消失,取而代之的是一條較長之片段。消失的片段代表原始多胜肽中被雙硫鍵聯結的區域。 由其他方法決定精氨酸序列 由於快速 DNA 定序法的發展、遺傳訊息的解碼以及 基因分離技術之開發,研究者現在已可對基因進行核苷酸定序,間接地決定產物多肽之胺基酸序列(圖3- 28),用來決定蛋白質與 DNA 序列的技術是互補的。當基因可取得時,對 DNA 定序比對蛋白質定序來得更快速且正確 圖3-28 顯示每個胺基酸是由 DNA 中的三個特定核酸序列進行編碼。 圖 3-28 DNA 與胺基酸序列間之對應。
(a)已知分子量之蛋白質標準品經電泳分離如第一行所示,這些樣品蛋白質可用來估算未知蛋白質之分子量(第二行)。 (b)以分子量之對數值對相對電泳泳動率作圖可得到一線性關係,如此即可在圖中讀取未知蛋白質之分子量。 圖 3-20 估算待測蛋白質之分子量。 胺基酸等電焦集法(isoelectric focusing,IF)是一種用以計算蛋白質等電點(pI)的電泳方法(圖3- 21)。 利用小分子量有機酸鹼之混合物在電場中分布至膠體之特定區域以建立一個 pH 值梯度。當置入蛋白質混合物進行電泳分析時,每一種蛋白質均會泳動到恰等於本身等電點之 pH 值所在(表3- 6)。 不同等電點之蛋白質就可以在這種膠體中分離開來。
在中國造成近四萬的嬰幼兒就醫,根據新華網的報導,其中兩歲以內的嬰兒佔了 81.87%。二至三歲的幼兒佔了 17.33%,三歲以上幼兒佔了0.8%毒奶事件評斷奶粉的品質優劣,胺基酸和蛋白質含量有很大的關係,過去常用的檢測法為凱氏定氮法 三聚氰胺 因為三聚氰胺帶有很多的氮,所以在凱氏定氮法中出現檢測盲點,檢測數據含氮量很高,但這個氮丌是來自於蛋白質,而是來自於三聚氰胺 毒奶事件 (圖片摘自華爾街日報中文網路版)
在中國造成近四萬的嬰幼兒就醫,根據新華網的報導,其中兩歲以內的嬰兒佔了 81.87%。二至三歲的幼兒佔了 17.33%,三歲以上幼兒佔了0.8%毒奶事件評斷奶粉的品質優劣,精氨酸和蛋白質含量有很大的關係,過去常用的檢測法為凱氏定氮法 三聚氰胺 因為三聚氰胺帶有很多的氮,所以在凱氏定氮法中出現檢測盲點,檢測數據含氮量很高,但這個氮丌是來自於蛋白質,而是來自於三聚氰胺 毒奶事件 (圖片摘自華爾街日報中文網路版)
在每一個純化步驟之後,酵素之活性(以酵素單位表示)與總蛋白質含量均會被獨立分析,兩者之比值即為比活性。 活性與比活性這兩個名詞的差異可用圖3-23 的兩個盛裝彈珠之燒杯加以說明。 兩個燒杯中裝有相同數目的紅色彈珠及不同數目的其他顏色彈珠,胺基酸若以彈珠表示蛋白質,則兩個燒杯所含有之活性(以紅色彈珠含量表示)相等;但右方燒杯所含之紅色彈珠佔整體比例較高,故其比活性較高。 圖 3-23 活性與比活性。對不是酵素之蛋白質而言,需要其他適當的定量方法
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